ⅠNயூக்ளிக் அமிலம்iஅறிமுகம்
நியூக்ளிக் அமிலம் deoxyribonucleic acid (DNA) மற்றும் ribonucleic acid (RNA) என பிரிக்கப்பட்டுள்ளது, இதில் RNA ஆனது ribosomal RNA(rRNA), messenger RNA(mRNA) என பிரிக்கப்பட்டு அதன் வெவ்வேறு செயல்பாடுகளுக்கு ஏற்ப RNA(tRNA) ஐ மாற்றுகிறது.டிஎன்ஏ முக்கியமாக நியூக்ளியஸ், மைட்டோகாண்ட்ரியா மற்றும் குளோரோஃபார்ம் ஆகியவற்றில் குவிந்துள்ளது, அதே நேரத்தில் ஆர்என்ஏ முக்கியமாக சைட்டோபிளாஸில் விநியோகிக்கப்படுகிறது.மரபணு வெளிப்பாட்டின் பொருள் அடிப்படையாக, நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல் மூலக்கூறு உயிரியல் ஆராய்ச்சி மற்றும் மருத்துவ மூலக்கூறு நோயறிதலில் மிக முக்கிய பங்கு வகிக்கிறது.நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தலின் செறிவு மற்றும் தூய்மையானது அடுத்தடுத்த PCR, வரிசைப்படுத்துதல், திசையன் கட்டுமானம், நொதி செரிமானம் மற்றும் பிற சோதனைகளை நேரடியாகப் பாதிக்கும்.
Ⅱ நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் சுத்திகரிப்பு முறை
① பீனால்/குளோரோஃபார்ம் பிரித்தெடுக்கும் முறை
ஃபீனால்/குளோரோஃபார்ம் பிரித்தெடுத்தல் என்பது டிஎன்ஏ பிரித்தெடுப்பதற்கான ஒரு பாரம்பரிய முறையாகும், இது முக்கியமாக மாதிரிகளுக்கு சிகிச்சையளிக்க இரண்டு வெவ்வேறு கரிம கரைப்பான்களைப் பயன்படுத்துகிறது, டிஎன்ஏ அடிப்படையிலான நியூக்ளிக் அமிலத்தை நீர் கட்டத்தில் கரைக்கிறது, கரிம கட்டத்தில் லிப்பிடுகள் மற்றும் இரண்டு கட்டங்களுக்கு இடையில் புரதங்கள்.இந்த முறை குறைந்த செலவு, அதிக தூய்மை மற்றும் நல்ல விளைவு ஆகியவற்றின் நன்மைகளைக் கொண்டுள்ளது.குறைபாடுகள் சிக்கலான செயல்பாடு மற்றும் நீண்ட நேரம்.
② ட்ரைசோல் முறை
டிரிசோல் முறை என்பது ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுப்பதற்கான ஒரு பாரம்பரிய முறையாகும்.டிரைசோல் முறையானது குளோரோஃபார்முடன் மையவிலக்குக்குப் பிறகு அக்வஸ் ஃபேஸ் மற்றும் ஆர்கானிக் கட்டமாகப் பிரிக்கப்படுகிறது, இதில் ஆர்என்ஏ அக்வஸ் கட்டத்தில் கரைக்கப்படுகிறது, அக்வஸ் கட்டம் ஒரு புதிய ஈபி குழாயுக்கு மாற்றப்படுகிறது, ஐசோப்ரோபனோலைச் சேர்த்த பிறகு மழைப்பொழிவு பெறப்படுகிறது, பின்னர் எத்தனால் சுத்திகரிப்பு செய்யப்படுகிறது.விலங்கு திசுக்கள், செல்கள் மற்றும் பாக்டீரியாக்களிலிருந்து ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுப்பதற்கு இந்த முறை பொருத்தமானது.
③ மையவிலக்கு நெடுவரிசை சுத்திகரிப்பு முறை
மையவிலக்கு நெடுவரிசை சுத்திகரிப்பு முறையானது சிறப்பு சிலிக்கான் மேட்ரிக்ஸ் உறிஞ்சுதல் பொருட்கள் மூலம் குறிப்பாக டிஎன்ஏவை உறிஞ்சும், அதே சமயம் RNA மற்றும் புரதம் சீராக கடந்து செல்லும், பின்னர் நியூக்ளிக் அமிலம், குறைந்த உப்பு அதிக PH மதிப்பு நீக்கம் ஆகியவற்றை இணைக்க அதிக உப்பு குறைந்த PH ஐப் பயன்படுத்தி நியூக்ளிக் அமிலத்தைப் பிரித்து சுத்திகரிக்க முடியும்.நன்மைகள் அதிக சுத்திகரிப்பு செறிவு, உயர் நிலைத்தன்மை, கரிம கரைப்பான் தேவை இல்லை, மற்றும் குறைந்த விலை.குறைபாடு என்னவென்றால், இது படிப்படியாக மையவிலக்கு செய்யப்பட வேண்டும், மேலும் செயல்பாட்டு படிகள்.
④ காந்த மணிகள் முறை
காந்த மணிகள் முறையானது செல் திசு மாதிரியை லைசேட் மூலம் பிரித்து, மாதிரியில் உள்ள நியூக்ளிக் அமிலத்தை வெளியிடுவது, பின்னர் நியூக்ளிக் அமில மூலக்கூறுகள் குறிப்பாக காந்த மணியின் மேற்பரப்பில் உறிஞ்சப்படுகிறது, அதே நேரத்தில் புரதங்கள் மற்றும் சர்க்கரைகள் போன்ற அசுத்தங்கள் வெளியேறுகின்றன. திரவம்.செல் திசு பிளவு, நியூக்ளிக் அமிலத்துடன் காந்த மணி பிணைப்பு, நியூக்ளிக் அமிலம் கழுவுதல், நியூக்ளிக் அமிலம் நீக்குதல் போன்றவற்றின் படிகள் மூலம், தூய நியூக்ளிக் அமிலம் இறுதியாக பெறப்படுகிறது.படி மையவிலக்கு தேவையில்லாமல் எளிமையான செயல்பாடு மற்றும் குறுகிய நேர பயன்பாடு ஆகியவை நன்மைகள்.இது குறைந்த தொழில்நுட்ப தேவைகள் மற்றும் தானியங்கி மற்றும் வெகுஜன செயல்பாட்டை உணர முடியும்.காந்த மணி மற்றும் நியூக்ளிக் அமிலத்தின் குறிப்பிட்ட கலவையானது பிரித்தெடுக்கப்பட்ட நியூக்ளிக் அமிலத்தை அதிக செறிவு மற்றும் தூய்மையுடன் உருவாக்குகிறது.குறைபாடு என்னவென்றால், தற்போதைய சந்தை விலை ஒப்பீட்டளவில் விலை உயர்ந்தது.
⑤ மற்ற முறைகள்
மேற்கூறிய நான்கு முறைகள் தவிர, கொதிக்கும் விரிசல், செறிவூட்டப்பட்ட உப்பு முறை, அயோனிக் சோப்பு முறை, அல்ட்ராசோனிக் முறை மற்றும் நொதி முறை போன்றவை உள்ளன.
Ⅲ நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் வகை
Foregene ஆனது உலகின் முன்னணி நேரடி PCR இயங்குதளம், இரட்டை நெடுவரிசை RNA ஐசோலேஷன் தளம் (DNA- மட்டும் + RNA மட்டும் ) உள்ளது.முக்கிய தயாரிப்புகளில் டிஎன்ஏ/ஆர்என்ஏ ஐசோலேஷன் கிட்கள், பிசிஆர் மற்றும் டைரக்ட் பிசிஆர் ரியாஜெண்ட்ஸ் மூலக்கூறு லேப் ரீஜென்ட்கள் வரிசை ஆகியவை அடங்கும்.
① மொத்த RNA பிரித்தெடுத்தல்
மொத்த ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் மாதிரிகளில் இரத்தம், செல்கள், விலங்கு திசுக்கள், தாவரங்கள், வைரஸ்கள் போன்றவை அடங்கும். மொத்த ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் மூலம் அதிக தூய்மை மற்றும் அதிக செறிவு பெறலாம், இதை ஆர்டி-பிசிஆர், சிப் பகுப்பாய்வு, விட்ரோ மொழிபெயர்ப்பில் பயன்படுத்தலாம் மூலக்கூறு குளோனிங், டாட் பிளட் மற்றும் பிற சோதனைகள்.
முன்னறிவிப்பு தொடர்பானதுஆர்என்ஏ தனிமைப்படுத்தல் கருவிகள்
விலங்கு மொத்த ஆர்என்ஏ தனிமைப்படுத்தல் கிட்--பல்வேறு விலங்கு திசுக்களில் இருந்து உயர் தூய்மை மற்றும் உயர்தர மொத்த ஆர்என்ஏவை விரைவாகவும் திறமையாகவும் பிரித்தெடுக்கவும்.
செல் மொத்த RNA ஐசோலேஷன் கிட்--மிகவும் சுத்திகரிக்கப்பட்ட மற்றும் உயர்தர மொத்த ஆர்என்ஏவை பல்வேறு வளர்ப்பு செல்களில் இருந்து 11 நிமிடங்களில் பெறலாம்.
தாவர மொத்த RNA ஐசோலேஷன் கிட்--குறைந்த பாலிசாக்கரைடு மற்றும் பாலிபினால் உள்ளடக்கம் கொண்ட தாவர மாதிரிகளிலிருந்து உயர்தர மொத்த ஆர்என்ஏவை விரைவாக பிரித்தெடுக்கவும்.
வைரல் ஆர்என்ஏ ஐசோலேஷன் கிட்--பிளாஸ்மா, சீரம், செல் இல்லாத உடல் திரவங்கள் மற்றும் செல் கலாச்சார சூப்பர்நேட்டண்டுகள் போன்ற மாதிரிகளிலிருந்து வைரஸ் ஆர்என்ஏவை விரைவாக தனிமைப்படுத்தி சுத்திகரிக்கவும்.
② மரபணு DNA பிரித்தெடுத்தல்
மரபணு DNA பிரித்தெடுத்தல் மாதிரிகளில் மண், மலம், இரத்தம், செல்கள், விலங்கு திசுக்கள், தாவரங்கள், வைரஸ்கள் போன்றவை அடங்கும். மரபணு DNA பிரித்தெடுத்தல் நொதி செரிமானம், DNA நூலக கட்டுமானம், PCR, ஆன்டிபாடி தயாரிப்பு, வெஸ்டர்ன் பிளட் கலப்பின பகுப்பாய்வு, மரபணு சிப், உயர் -செயல்திறன் வரிசைமுறை மற்றும் பிற சோதனைகள்.
முன்னறிவிப்பு தொடர்பானதுடிஎன்ஏ தனிமைப்படுத்தும் கருவிகள்
விலங்கு திசு டிஎன்ஏ ஐசோலேஷன் கிட்விலங்கு திசுக்கள், செல்கள் போன்ற பல ஆதாரங்களில் இருந்து மரபணு DNAவை விரைவாக பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் சுத்திகரித்தல்.
இரத்த டிஎன்ஏ மிடி கிட் (1-5 மிலி)--உயர்-தரமான மரபணு டிஎன்ஏவை ஆன்டிகோகுலேட்டட் இரத்தத்திலிருந்து (1-5மிலி) விரைவாக சுத்திகரிக்கவும்.
புக்கால் ஸ்வாப்/எஃப்டிஏ கார்டு டிஎன்ஏ ஐசோலேஷன் கிட்--புக்கால் ஸ்வாப்/எஃப்டிஏ கார்டு மாதிரிகளில் இருந்து உயர்தர ஜீனோமிக் டிஎன்ஏவை விரைவாக சுத்திகரிக்கவும்.
தாவர டிஎன்ஏ ஐசோலேஷன் கிட்--தாவர மாதிரிகளிலிருந்து (பாலிசாக்கரைடுகள் மற்றும் பாலிஃபீனால் தாவர மாதிரிகள் உட்பட) உயர்தர மரபணு டிஎன்ஏவை விரைவாகச் சுத்திகரிக்கவும் பெறவும்
③ பிளாஸ்மிட் பிரித்தெடுத்தல்
பிளாஸ்மிட் என்பது உயிரணுக்களில் உள்ள ஒரு வகையான வட்ட வடிவ சிறிய மூலக்கூறு டிஎன்ஏ ஆகும், இது டிஎன்ஏ மறுசீரமைப்புக்கான பொதுவான கேரியர் ஆகும்.பிளாஸ்மிட் பிரித்தெடுக்கும் முறை ஆர்என்ஏவை அகற்றுவது, பாக்டீரியா மரபணு டிஎன்ஏவில் இருந்து பிளாஸ்மிட்டைப் பிரிப்பது மற்றும் ஒப்பீட்டளவில் தூய்மையான பிளாஸ்மிட்டைப் பெற புரதம் மற்றும் பிற அசுத்தங்களை அகற்றுவது.
பொது பிளாஸ்மிட் மினி கிட்--மாற்றம் மற்றும் நொதி செரிமானம் போன்ற வழக்கமான மூலக்கூறு உயிரியல் சோதனைகளுக்காக மாற்றப்பட்ட பாக்டீரியாவிலிருந்து உயர்தர பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏவை விரைவாக சுத்திகரிக்கவும்
④ பிற பிரித்தெடுத்தல் வகைகள், miRNA பிரித்தெடுத்தல், முதலியன.
விலங்கு மைஆர்என்ஏ ஐசோலேஷன் கிட்பல்வேறு விலங்கு திசுக்கள் மற்றும் உயிரணுக்களிலிருந்து 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA ஆகியவற்றின் சிறிய RNA துண்டுகளை விரைவாகவும் திறமையாகவும் பிரித்தெடுக்கவும்
Ⅳ நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் சுத்திகரிப்பு விளைவுக்கான தேவைகள்s
① நியூக்ளிக் அமிலத்தின் முதன்மை கட்டமைப்பின் ஒருமைப்பாட்டை உறுதி செய்ய.
② புரதங்கள், சர்க்கரைகள், லிப்பிடுகள் மற்றும் பிற பெரிய மூலக்கூறுகளின் குறுக்கீட்டைக் குறைக்கவும்
③ நியூக்ளிக் அமில மாதிரிகளில் நொதியைத் தடுக்கக்கூடிய கரிம கரைப்பான் அல்லது உலோக அயனிகளின் அதிக செறிவு இருக்கக்கூடாது.
④ டிஎன்ஏவை பிரித்தெடுக்கும் போது ஆர்என்ஏ மற்றும் பிற நியூக்ளிக் அமில மாசுபாடுகள் அகற்றப்பட வேண்டும், அதற்கு நேர்மாறாகவும்.
பின் நேரம்: நவம்பர்-24-2022
